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Bradford法蛋白浓度测定试剂盒图片
产品货号:
QN1072
中文名称:
Bradford法蛋白浓度测定试剂盒
英文名称:
Bradford Protein Assay Kit
产品规格:
2500T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(Imax),由465nm变为595nm,在一定的浓度范围内,测定的吸光度值A595与蛋白质浓度成正比。Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM,但受略高浓度的去垢剂影响,需确保SDS的浓度低于0.1%,Triton X-100低于0.1%,Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢剂的样品推荐使用百奥莱博生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒。

产品组成:
组成规格保存
5×G250染色液100mL2~8℃
PBS稀释液30mL2~8℃
蛋白标准(5mg/mL BSA)1mL-20℃


操作说明(仅供参数):

一、微孔酶标仪法
  • 完全溶解蛋白标准品,取10μL,稀释至250μL,使终浓度为0.2mg/mL。待测蛋白样品在什么溶液中,标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释标准品。
  • 5×G250染色液使用前请颠倒3~5次混匀,取1mL 5×G250染色液,加入4mL双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
  • 将标准品按0、2、4、6、8、12、16、20微升分别加到96孔板中,加PBS稀释液补足到20微升。
  • 将样品作适当稀释(最好多做几个梯度,如作2倍、4倍、8倍稀释),加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差,标准线前面的点可能不很准确,所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
  • 各孔加入200微升稀释后的1×G250染色液,室温放置3~5分钟。
  • 用酶标仪测定A595,或560~610nm之间的其它波长的吸光度。
  • 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。


二、分光光度计法
如无酶标仪,染色反应可在离心管中进行,反应液混匀后加入比色皿中,使用分光光度计测定吸光值。步骤如下:
  • 取八支(或者更多)干净的10mL离心管,标记上号。
  • 取100μLBSA加入PBS 2.4mL稀释至终浓度为0.2mg/mL。
  • 5×G250染色液使用前请颠倒3~5次混匀,取10mL 5×G250染色液,加入40mL双蒸水,混匀成1×G250染色液,此1×G250染色液可在4℃保存一周。
  • 按下表加入试剂(以每孔5mL计,多余的用来清洗比色皿)
    离心管号1234567(样品管1)8(样品管2)9(样品管3)
    标准蛋白BSA0μL100μL200μL300μL400μL500μL500μL适当稀
    释的样品1
    500μL适当稀
    释的样品2
    ……
    PBS500μL400μL300μL200μL100μL0μL0μL0μL0μL
    1×G250染色液5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL5mL

  • 反应3分钟后测OD值。为了实验的准确性,可每间隔2分钟加一管染色液,每间隔2分钟测一管OD值。如下表:
    离心管号12345678……
    加染色液(分钟)02468101214……
    测OD值357911131517……

Bradford法蛋白浓度测定试剂盒
此图为伯乐酶标仪680,单波长,570nm测得。室温反应三分钟。
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